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病毒采樣管保存液主要有兩種

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       市場上廣泛使用的病毒采血管保存液主要有兩種,一種是以運送培養(yǎng)基為基礎(chǔ)改良的病毒維持液,,另一種則為核酸提取裂解液改良的保存液,。

       前者的主要成分是Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)液(MEM)或Hank's平衡鹽,添加了病毒生存所需的鹽類,、氨基酸,、維生素、葡萄糖以及蛋白質(zhì),,這種保存液使用酚紅鈉鹽做為指示劑,,溶液pH值在6.6-8.0時溶液呈粉紅色,。保存液中添加了須的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白質(zhì),,蛋白質(zhì)的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,,可以穩(wěn)定病毒的蛋白質(zhì)外殼。由于保存液營養(yǎng)成分豐富,,有利于病毒的成活但是也有利于細菌的生長,,如果保存液中污染了細菌,則會大量繁殖,,其代謝產(chǎn)物中的二氧化碳會使保存液pH值下降,,從粉紅色變?yōu)辄S色。因而大多數(shù)廠家都在配方中添加了抑菌劑成分,,推薦使用的抑菌劑為青霉素,、鏈霉素、慶大霉素及多粘菌素B等,,不推薦使用疊氮鈉,、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)等,因為這些組分對PCR反應(yīng)有影響,。由于這種保存液提供的樣本基本是活病毒,,可以大程度保持樣本的原始性,后續(xù)不僅可以用于病毒的核酸提取檢測,,還能用于病毒的培養(yǎng)和分離,。但是用于檢測時應(yīng)該注意的是須滅活以后再進行核酸提取純化。

       另一種以核酸提取裂解液為基礎(chǔ)配制的保存液,,主要成分為平衡鹽類,、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍,、鹽酸胍等),、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨),、苯酚,、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT),、蛋白酶K等幾種或多種組分,,這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase),,如果僅用于RT-PCR較為合適,,但裂解液可以滅活病毒,這種樣本不能用于病毒的培養(yǎng)分離。

       病毒采血管保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀,、乙二胺四乙酸二鈉等),,不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰),,以免影響PCR檢測,。