從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說(shuō)是 *基本的工作了,，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析,，可供選擇的方法非常多,，亂花漸欲迷人眼，如何選擇 *適合的方法,，成了很多人實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前 *難以抉擇的事情,。我們從兩個(gè)方面，層層剝繭,，分析 *佳的實(shí)驗(yàn)方法,。

　　1、 全血的采集保存和DNA的提取

　　I.用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血,，抗凝劑一般有EDTA和肝素,，EDTA更好一些，不會(huì)影響下游的反應(yīng),，如果沒(méi)有采血管,，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液,，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,，顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃,，一般2-3年內(nèi)均可以提取,，保存時(shí)間越短，提取的質(zhì)量越高,， *好在2個(gè)月內(nèi)提取,。

　　II.DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種(比如Qiagen、Promega,、Bioteke;摒棄酚氯仿手提的方法,，時(shí)間長(zhǎng)毒性大)，原理及步驟基本相同,。雖然各公司推出了N多型號(hào),，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看,，基本就是離心柱和溶液型兩種,。一般來(lái)說(shuō)，離心柱(DP1801)的提取純度高一些,，但是處理量小(0.1-1ml),、得率略低;溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大(1-10ml)得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上,，一般選擇溶液型的方法提取.在說(shuō)到國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口差別的時(shí)候,，很多人以為進(jìn)口一定比國(guó)產(chǎn)的好，我們覺(jué)得沒(méi)有 *好,，只有更好!在不斷的進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化之后,，全血基因組DNA提取試劑盒DP2101或DP2201開(kāi)創(chuàng)了第三代技術(shù),，不需要蛋白酶K消化,，進(jìn)口的都是要借助蛋白酶K的啊!DP2101或DP2201減少了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時(shí)間,，而且提取量和穩(wěn)定性更好。

　　2,、 全血RNA如何提取

　　I.全血RNA提取過(guò)程哪些是RNA降解的因素?

　　全血中RNA酶是非常豐富的,，RNA在沒(méi)有保護(hù)的狀態(tài)下很容易降解!哪些是狀態(tài)RNA不受保護(hù)呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過(guò)程,，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液,，沒(méi)有制止RNase的成份，這時(shí)候RNA不受保護(hù);DNA酶消化的時(shí)候RNA也不受保護(hù),，這個(gè)時(shí)候也沒(méi)有制止RNase的成份,。

　　II.什么樣的提取方法更好?

　　我們?cè)谶x擇方法的時(shí)候要傾向于對(duì)RNA全程有保護(hù)的方法!一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸,，還要經(jīng)過(guò)DNA酶的消化去除DNA,，這種并不是 *好的方法，過(guò)程中有很多RNA降解的因素,。所以直接裂解法是 *好的方法,，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液RLS——RP4001血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液，迅速顛倒混勻,。裂解液RLS含有強(qiáng)烈的蛋白變性劑,，能迅速變性蛋白，是RNase變性,，不能對(duì)RNA降解,。裂解后的混合液還可以用來(lái)運(yùn)輸，以避免RNA降解,，這個(gè)方法成為博奧生物制作表達(dá)譜芯片RNA運(yùn)輸和提取的推薦方法